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BD BiocoatTM 細(xì)胞檢測相關(guān)系統(tǒng)

更新時間:2017-09-08點(diǎn)擊次數(shù):857

Biocoat腫瘤侵襲系統(tǒng)

BD 產(chǎn)品貨號354166, 354165

儲存和運(yùn)輸:-20度儲存,干冰運(yùn)輸。

使用指南:

BD BiocoatTM 腫瘤侵襲系統(tǒng)由包被Matrigel基質(zhì)的特殊材質(zhì)BD FluoroBlok 熒光屏蔽8.0μm PET膜的培養(yǎng)小室組合而成。BD BiocoatTM 腫瘤侵襲系統(tǒng)具有以下特點(diǎn):提高腫瘤細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)的通量;自動化非破壞式的熒光檢測;節(jié)約抗腫瘤轉(zhuǎn)移藥物篩選的時間和勞動力;高度可重復(fù)性:平均z’=0.7(24);平均z’=0.66(96);使用簡便:無需反復(fù)取液和操作,僅需加入細(xì)胞、標(biāo)記物,然后直接讀板。

操作過程:

凍融

-20冰箱中取出產(chǎn)品,使其自然升溫到室溫。取出培養(yǎng)板在細(xì)胞小室內(nèi)加入到500μL 37預(yù)熱的PBS,37CO2環(huán)境下孵育2小時。解凍后,小心去除小室內(nèi)的培養(yǎng)基,避免破壞Matrigel基質(zhì)膜。

BD鈣黃綠素Calcein AM熒光染色劑后標(biāo)記法

細(xì)胞通過侵襲消化基質(zhì)膜后遷移到下小室,采用熒光標(biāo)記定量細(xì)胞。細(xì)胞的侵襲能力用終點(diǎn)計(jì)算法計(jì)算得到。對于采用實(shí)時動力曲線的計(jì)算,推薦使用前標(biāo)記法。

2.1 如步驟1準(zhǔn)備培養(yǎng)板。

2.2 胰酶消化細(xì)胞單層后制得細(xì)胞懸液,溶于無血清DMEM培養(yǎng)基,推薦濃度為5×104 cells/mL

2.3 上小室中加入500μL細(xì)胞懸液(2×104 cells)。

2.4 通過進(jìn)樣口在下小室中加入750μL誘導(dǎo)劑。

2.5 37,5%CO2 條件下孵育培養(yǎng)板和對照板20-22小時(由細(xì)胞類型決定)。

2.6 孵育后,小心去除上小室中的培養(yǎng)基。避免破壞Matrigel基質(zhì)膜。可以通過反扣住培養(yǎng)板,輕輕拍打,以使培養(yǎng)基的傾倒。

2.7 將培養(yǎng)小室轉(zhuǎn)移到另一塊24孔板中,該孔板含有0.5 mL每孔的4μg/mL 鈣黃綠素(溶于HBSS)。在37,5%CO2的環(huán)境下培養(yǎng)一小時。

3、DilC12(3)熒光染色劑預(yù)標(biāo)記法

細(xì)胞接種于孔板之前先用染色劑標(biāo)記,可用于均一化實(shí)驗(yàn),所產(chǎn)生的實(shí)時動力數(shù)據(jù)可揭示細(xì)胞通過基底膜侵襲的動力曲線,不需要分解和破壞各個時間點(diǎn)。

3.11.所示凍融。

3.2 10μg/mLDilC12(3)溶解于含10%FBSDMEM中,37 1小時標(biāo)記單層細(xì)胞。

3.3 胰酶消化細(xì)胞單層,制備細(xì)胞懸液,溶于無血清DMEM培養(yǎng)基,濃度為1×105 cells/mL。

3.4 上小室加入500μL細(xì)胞懸液(5×104cells)。

3.5通過進(jìn)樣口在下小室加入750μL誘導(dǎo)劑。

3.6 37,5%CO2環(huán)境下孵育培養(yǎng)板和對照板18-24小時(由細(xì)胞類型決定)。在549激發(fā)波長和565nm發(fā)射波長條件下進(jìn)行熒光讀數(shù)。

4、數(shù)據(jù)計(jì)算

侵襲率%=受趨化劑誘導(dǎo)通過Matrigel基質(zhì)膜的細(xì)胞平均相對熒光值/受趨化劑誘導(dǎo)通過未包被FluoroBlok熒光膜的細(xì)胞平均相對熒光值×100

注意:數(shù)據(jù)可以用相對熒光值RFU或侵襲百分比表示,后者在標(biāo)準(zhǔn)化數(shù)據(jù)處理中更有用。背景扣除,計(jì)算平均背景值,將其從各個孔板中扣除。

 

自動化操作注意事項(xiàng)

BD Falcon FluoroBlok 24孔板培養(yǎng)小室系統(tǒng)能適用于自動化操作系統(tǒng)。蓋子可以用標(biāo)準(zhǔn)機(jī)械手取走,也可用吸力取走。為了避免各孔間污染,孔板設(shè)定為一個統(tǒng)一的方向。為了與培養(yǎng)小室匹配,確保Falcon的商標(biāo)均在2者上方,面向同一個方向。任何規(guī)格的槍頭都能達(dá)到小室的兩邊。包括50μL100μL,200μL,250μL,1000μL。

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